การตรวจจับ PCR

การตรวจจับ PCR

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) ใช้ชิ้นส่วนของ DNA เป็นแม่แบบ และด้วยการมีส่วนร่วมของ DNA polymerase และสารตั้งต้นของนิวคลีโอไทด์ DNA จะถูกขยายให้มีปริมาณเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์โครงสร้างและหน้าที่ วิธีการตรวจหา PCR มีความสำคัญอย่างยิ่งในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อแบคทีเรียอย่างรวดเร็วทางคลินิก

หลักการของ PCR ใช้เพื่อขยายชิ้นส่วน DNA ซึ่งอยู่ระหว่างลำดับที่รู้จักสองลำดับ คล้ายกับกระบวนการจำลองแบบของ DNA ตามธรรมชาติ โมเลกุลดีเอ็นเอที่จะขยายใช้เป็นแม่แบบ และชิ้นส่วนโอลิโกนิวคลีโอไทด์คู่หนึ่งที่ประกอบกับ 5'ปลายและ 3'ส่วนปลายของเทมเพลตใช้เป็นสีรองพื้น ภายใต้การกระทำของ DNA polymerase จะเป็นไปตามแม่แบบตามกลไกการจำลองแบบสงวนไว้ครึ่งหนึ่ง การขยายสายโซ่จนเสร็จสิ้นการสังเคราะห์ DNA ใหม่ ทำซ้ำขั้นตอนนี้ ชิ้นส่วน DNA เป้าหมายสามารถขยายได้

(PCR) เป็นวิธีการสังเคราะห์ชิ้นส่วนดีเอ็นเอจำเพาะด้วยเอนไซม์ในหลอดทดลอง ประกอบด้วยหลายขั้นตอนของการทำให้เสียสภาพที่อุณหภูมิสูง การหลอมที่อุณหภูมิต่ำ และการยืดอุณหภูมิที่เหมาะสม คุณสมบัติต่างๆ เช่น ความไวสูง ใช้งานง่าย และประหยัดเวลา สามารถใช้ไม่เพียงแต่ในการวิจัยขั้นพื้นฐาน เช่น การแยกยีน การโคลนนิ่ง และการวิเคราะห์ลำดับกรดนิวคลีอิก แต่ยังใช้ในการวินิจฉัยโรคหรือสถานที่ใดๆ ที่มี DNA และ RNA ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (Polymerase Chain Reaction, PCR for short) เรียกอีกอย่างว่าการโคลนโมเลกุลที่ปราศจากเซลล์หรือลำดับดีเอ็นเอจำเพาะในเทคโนโลยีการขยายพันธุ์ด้วยเอนไซม์ที่ควบคุมด้วยเอนไซม์ในหลอดทดลองในหลอดทดลอง

การจำลองแบบกึ่งสงวนไว้ของ DNA เป็นวิธีที่สำคัญในการวิวัฒนาการและการผ่านของสิ่งมีชีวิต ดีเอ็นเอสายคู่สามารถถูกทำให้เสียสภาพและหลอมรวมเป็นสายเดี่ยวได้ภายใต้การกระทำของเอ็นไซม์ต่างๆ ด้วยการมีส่วนร่วมของ DNA polymerase และโปรโมเตอร์ ทำให้ DNA ที่มีเกลียวคู่สามารถจำลองเป็นสองโมเลกุลเดียวกันได้ตามหลักการของการจับคู่เบสเสริม ในการทดลอง พบว่า DNA สามารถถูกทำให้เสียสภาพและหลอมเหลวที่อุณหภูมิสูงได้ และสามารถแปลงสภาพเป็นเกลียวคู่ได้อีกครั้งเมื่ออุณหภูมิลดลง ดังนั้น โดยการควบคุมการเปลี่ยนสภาพและการแปรสภาพของ DNA ผ่านการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิ และการออกแบบไพรเมอร์ในฐานะโปรโมเตอร์ การเพิ่ม DNA polymerase และ dNTP จะทำให้การจำลองแบบในหลอดทดลองของยีนจำเพาะสมบูรณ์ได้

ประเด็นง่ายๆ คือ การใช้อุปกรณ์พิเศษ ใช้ dNTPS, Mg2+, ไพรเมอร์เฉพาะ, DNA polymerase และระบบบัฟเฟอร์ เพิ่มเทมเพลต ซึ่งเป็นตัวอย่าง DNA สำหรับการขยายในหลอดทดลอง และดำเนินการอิเล็กโตรโฟรีซิส หากสามารถขยายได้ และขนาดของผลิตภัณฑ์ที่ขยาย สอดคล้องกับแถบเป้าหมาย แสดงว่าไพรเมอร์และแม่แบบมีความเฉพาะเจาะจง และดัชนีการตรวจจับเป็นค่าบวก

วิธีการและขั้นตอนการตรวจจับกรดนิวคลีอิก PCR

การทดสอบกรดนิวคลีอิกต้องมีห้าขั้นตอน ได้แก่ การสุ่มตัวอย่าง การเก็บตัวอย่าง การเก็บรักษา การสกัดกรดนิวคลีอิก และการทดสอบด้วยคอมพิวเตอร์

การตรวจจับกรดนิวคลีอิก

ขั้นตอนแรกคือการรวบรวมสารคัดหลั่งของมนุษย์และเช็ดโพรงจมูกหรือผนังด้านหลังของคอหอยและต่อมทอนซิลคอหอยทวิภาคีด้วยการทดสอบจมูกหรือการทดสอบคอหอย

ในขั้นตอนที่สอง เจ้าหน้าที่ทางการแพทย์เก็บตัวอย่าง จุ่มหัวชิ้นทดสอบในสารละลายถนอมเซลล์ และขันฝาท่อทันทีหลังจากที่หางหัก

ในส่วนที่สาม ให้ใส่ตัวอย่างในถุงสุญญากาศ เก็บไว้และส่งไปตรวจสอบทันเวลา

ขั้นตอนที่สี่คือการส่งตัวอย่างไปที่ห้องปฏิบัติการเพื่อสกัดกรดนิวคลีอิก

ในขั้นตอนที่ห้า สารสกัดจะต้องทำปฏิกิริยาขยาย PCR เรืองแสง

ยังต้องการวัสดุสิ้นเปลืองและเครื่องมือบางอย่าง

PCR Instrument, PCR Tube, Pipette Tip, Deep Well Plate, Reservoir, and reagents added