เทคโนโลยี PCR นั้นคล้ายคลึงกับกระบวนการจำลองแบบตามธรรมชาติของ DNA และความจำเพาะขึ้นอยู่กับไพรเมอร์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่เสริมกันที่ปลายทั้งสองของลำดับเป้าหมาย PCR ประกอบด้วยขั้นตอนปฏิกิริยาพื้นฐานสามขั้นตอน: การเปลี่ยนสภาพ การหลอม และการขยาย กระบวนการทำปฏิกิริยานี้ดำเนินการในภาชนะปฏิกิริยา PCR ด้วยการพัฒนาอย่างต่อเนื่องของเครื่องมือขยายพันธุ์ของยีน ภาชนะบรรจุของปฏิกิริยายังได้สัมผัสกับการพัฒนาทีละน้อยของหลอดสำหรับการปั่นแยกจาก 1.5 มล. เป็น 0.2 มล. (0.25 มล.) ไปจนถึงผนังบาง {{ 7}}.2ml เฉพาะสำหรับ PCR , 0.1mlpcr หลอด ด้วยจำนวนปฏิกิริยาการขยาย PCR ที่เพิ่มขึ้น คอนเทนเนอร์การขยายยีนปริมาณงานสูงสำหรับแถบ PCR และเพลต PCR จะค่อยๆ ก่อตัวขึ้น
PCR ประกอบด้วยขั้นตอนปฏิกิริยาพื้นฐานสามขั้นตอน: denaturation-annealing-extension
การเปลี่ยนสภาพของแม่แบบ DNA:
หลังจากที่แม่แบบ DNA ถูกทำให้ร้อนถึงประมาณ 94 องศาในช่วงระยะเวลาหนึ่ง DNA แบบสองสายของ DNA แม่แบบหรือ DNA แบบสองสายที่เกิดขึ้นจากการขยาย PCR จะแยกออกจากกัน เพื่อให้สามารถรวมกับไพรเมอร์เพื่อเตรียม สำหรับปฏิกิริยารอบต่อไป
การหลอม (การเปลี่ยนสภาพ) ของเทมเพลต DNA ด้วยไพรเมอร์:
หลังจากที่แม่แบบ DNA ถูกแปลงสภาพให้เป็นสายเดี่ยวโดยให้ความร้อน และอุณหภูมิลดลงเหลือประมาณ 55 องศา ไพรเมอร์จะถูกจับคู่กับลำดับเสริมของสายเดี่ยวของ DNA แม่แบบ
ส่วนขยายของไพรเมอร์:
ภายใต้การกระทำของ Taq คอนจูเกต DNA template-primer ใช้ dNTP เป็นวัตถุดิบในการทำปฏิกิริยาเพื่อสังเคราะห์ห่วงโซ่การจำลองแบบกึ่งสงวนใหม่ซึ่งประกอบกับสายโซ่ DNA แม่แบบตามหลักการของการจับคู่เบสและการจำลองแบบกึ่งสงวน
หลักการพื้นฐานของเทคโนโลยี PCR
เทคโนโลยีนี้อาศัยปฏิกิริยาการสังเคราะห์ด้วยเอนไซม์ของ DNA polymerase เมื่อมีแม่แบบ DNA, ไพรเมอร์ และดีออกซีไรโบนิวคลีโอไทด์สี่ตัว
DNA polymerase ใช้ DNA สายเดี่ยวเป็นแม่แบบเพื่อเริ่มการสังเคราะห์ด้วย DNA ที่มีเกลียวคู่ขนาดเล็ก ไพรเมอร์โอลิโกนิวคลีโอไทด์สังเคราะห์หนึ่งหรือสองชนิดถูกรวมเข้ากับลำดับเสริมในแม่แบบ DNA สายเดี่ยวเพื่อสร้าง DNA ที่มีสายคู่บางส่วน
ภายใต้อุณหภูมิและสภาพแวดล้อมที่เหมาะสม DNA polymerase จะเพิ่มดีออกซีโมโนนิวคลีโอไทด์ไปที่ปลาย 3´-OH ของไพรเมอร์ และใช้สิ่งนี้เป็นจุดเริ่มต้นเพื่อขยายไปตามทิศทาง 5´→3´ ของเทมเพลตเพื่อสังเคราะห์สายเสริม DNA ใหม่
ความแตกต่างระหว่างหลอด PCR และหลอดหมุนเหวี่ยง
PCR หลอด:
แผ่นปฏิกิริยา PCR คือ 96-หลุมหรือ 384-หลุม ซึ่งออกแบบมาเป็นพิเศษสำหรับปฏิกิริยาแบบกลุ่ม หลักการคือปริมาณงานของเครื่อง PCR และซีเควนเซอร์โดยทั่วไปคือ 96 หรือ 384
หลอดหมุนเหวี่ยง:
หลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงไม่จำเป็นต้องเป็นหลอด PCR หลอดหมุนเหวี่ยงมีหลายประเภทตามความจุ ยาที่ใช้กันทั่วไปคือ 1.5 มล. 2 มล. 5 มล. 15 หรือ 50 มล. และหลอดที่เล็กที่สุด (250ul) สามารถใช้เป็นหลอด PCR ได้
วิธีเลือกหลอด PCR
เราเลือกวางท่อ PCR ด้วยความหวังว่าจะเลือกตำแหน่งอุณหภูมิที่แม่นยำที่สุด
ตำแหน่งอุณหภูมิที่แม่นยำที่สุดควรเป็นตำแหน่งเหนือเซ็นเซอร์อุณหภูมิใต้โมดูล (โดยไม่คำนึงถึงอุณหภูมิที่ไม่ถูกต้องของเซ็นเซอร์)
ตำแหน่งของเซ็นเซอร์อุณหภูมิของอุปกรณ์ PCR ต่างกัน
ตัวอย่างเช่น 2720 ของ AB มีเพียงหนึ่งตัวที่อยู่ตรงกลาง MJ's 200 มีเซ็นเซอร์สามตัว ซึ่งอยู่ล่างซ้าย กลางและขวาบน Eppendorf's ควรอยู่ในแถว A หรือ H และ Dongshenglong 811 มีเซ็นเซอร์อุณหภูมิสามตัว B{{3} } ควรเลือก , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12 เนื่องจากจุดเหล่านี้เป็นจุดที่ตรงต่อเวลาของอุณหภูมิ
