เพลตเพาะเลี้ยงเซลล์เป็นที่นิยมใช้โดยทั่วไปและเป็นวัสดุสิ้นเปลืองที่สำคัญในการทดลองเพาะเลี้ยงเซลล์ เนื่องจากสามารถประหยัดเวลาและวัสดุรีเอเจนต์สำหรับการทดลองเซลล์ และสามารถตั้งค่าตัวแปรไดนามิกหลายตัวพร้อมกันเพื่ออำนวยความสะดวกในการสังเกตและตรวจจับ
จานเพาะเชื้อ
1. ฝาของ 96 24-จานเพาะเชื้อหรือจานเพาะเชื้อหลวมมาก ซึ่งสะดวกต่อการระบายอากาศ แต่แบคทีเรีย เชื้อรา และสารมลพิษอื่นๆ จะเล็ดลอดเข้าไปด้วยหรือไม่
คำตอบ: (1) ฝาปิดหลวมมากและเป็นของวัฒนธรรมกึ่งเปิด จุดประสงค์ของการทำเช่นนี้คือการหายใจ (อันที่จริง เพื่อให้ CO2 ภายนอกจานเพาะเลี้ยงแลกเปลี่ยนกับจานเพาะเชื้ออย่างเต็มที่เพื่อรักษาค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อ)
(2) มีข้อดีและข้อเสียซึ่งเพิ่มความเป็นไปได้ของมลพิษ นอกจากนี้ ยังทำให้ของเหลวในจานเพาะเชื้อระเหย ซึ่งมีความโดดเด่นในด้านการจ่ายยาที่แม่นยำ ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีมาตรการสองประการต่อไปนี้:
ก) อากาศในตู้ฟักไข่ต้องสะอาด (ใช้แสงอัลตราไวโอเลตเป็นประจำ แอลกอฮอล์ขัดผิว และควรเปิดและปิดตู้ฟักไข่ให้น้อยที่สุดเท่าที่จะทำได้)
ข) ความชื้นในตู้ฟักจะต้องคงไว้ที่ 100 เปอร์เซ็นต์ตลอดเวลา (อ่างที่ใส่น้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วไว้ในตู้อบ) ใส่ใจกับการดำเนินการปลอดเชื้อ!
2. เซลล์ของฉันได้รับการฉีดวัคซีนบนจานเพาะเชื้อ และเซลล์จะรวมตัวกันอยู่ที่ส่วนปลายเสมอ ฉันควรทำอย่างไรดี? ฉันเห็นว่าห้องขังของสหายบางคนรวมตัวกันอยู่ตรงกลาง คุณภาพของเพลทมีปัญหาหรือไม่?
A: คุณผสมเซลล์ของคุณอย่างไร? ปิเปตเป่าหรือเขย่าจานเพาะเชื้อหรือไม่? หากเป็นอย่างหลังและเขย่าเป็นวงกลม มีโอกาสมากที่เซลล์จะถูกเหวี่ยงไปยังส่วนรอบๆ เนื่องจากแรงเหวี่ยงส่งผลให้เซลล์อยู่ตรงกลาง น้อยกว่าสี่สัปดาห์! คุณสามารถลองด้วยตัวคุณเอง!
วิธีที่ดี: ก่อนที่คุณจะเพาะจานเพาะเมล็ด ให้ใส่จานเพาะลงในตู้อบสัก 2-3 ชั่วโมงเพื่อให้อิ่มตัวแล้วจึงนำออกมา เมื่อเพาะเซลล์ควรใช้แรงเบา คุณสามารถใช้ดริปเปอร์ที่ด้านข้างของรูจานเพาะเลี้ยงอย่างช้าๆ เพิ่ม เพื่อให้สารแขวนลอยของเซลล์ไหลลงสู่หลุมของจาน และเซลล์เพาะเลี้ยงจะเติบโตอย่างสม่ำเสมออย่างมาก จำไว้ว่าอย่าเขย่าออสซิลเลเตอร์ มิฉะนั้นเซลล์ของคุณจะจับตัวเป็นก้อนอย่างที่คุณพูด
3. เซลล์ของฉันผ่านตามปกติ แต่เมื่อประเภทหนึ่งเข้าสู่จานหกหลุม (โดยไม่คำนึงถึงการเพิ่มและการควบคุมยา) จะมีเซลล์สองหรือสามหลุม (สุ่ม) ที่เติบโตไม่ดี มีขนาดเล็ก และดูเหมือน ที่จะหัก มีใครเคยเจอแบบนี้บ้าง? เหตุผลคืออะไร?
ตอบ: อาจเกี่ยวข้องกับอุณหภูมิของของเหลวที่คุณเติมเข้าไป ถ้าเซลล์ของคุณเพิ่งถูกนำออกมาเพื่อเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อและเพิ่มอาหารเลี้ยงเชื้อ และนำอาหารเลี้ยงเชื้อออกจากตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศาเร็ว ๆ นี้ เซลล์จะแข็งตัวจนตายได้ง่าย ขอแนะนำให้คุณบ่มอาหารเลี้ยงเชื้อในตู้ฟักเป็นเวลา 15 นาทีก่อน
นอกจากนี้ยังเกี่ยวข้องกับสถานะการเจริญเติบโตของเซลล์ของคุณ เซลล์ก่อนการให้ยาสามารถบ่มด้วยซีรั่มที่มีความเข้มข้นสูง ตรวจสอบให้แน่ใจว่าเซลล์อยู่ในสภาพดี
หรือจะบ่มในอ่างน้ำที่มีองศา 37-ก็ได้ หรือปัญหาของจานเพาะเชื้อเอง คุณสามารถลองใช้จานเพาะเชื้ออื่นได้ ความเป็นไปได้อีกอย่างคือปัญหาสถานะของเซลล์ ปรับความเข้มข้นของซีรั่มเมื่อเพาะจาน
4. เมื่อไม่กี่วันมานี้ ฉันใช้จานเพาะเชื้อ 6 หลุมเพื่อเพาะเชื้อในเซลล์ หลังจากเพาะได้ 24 ชม. ก็เปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อ ก่อนเปลี่ยนสื่อ ฉันสังเกตเห็นว่าเซลล์ยึดติดกับผนัง และสถานะดีมาก หลังจากเปลี่ยนสื่อแล้ว ผมก็ใช้กล้องจุลทรรศน์ทันที พบว่าเซลล์เกือบครึ่งในแต่ละหลุมแสดงอาการใกล้ตาย เซลล์จะเล็กลงและสร้างเศษซากออกมามาก ส่วนอีกครึ่งเซลล์เป็นปกติ มีสันปันน้ำระหว่างเซลล์ผิดปกติกับเซลล์ปกติ ครึ่งวงกลมบนดี ครึ่งวงกลมล่างไม่ดี เป็นอย่างไร นี้? เกิดอะไรขึ้น?
ตอบ: คุณสามารถดูได้ว่ามีสาเหตุดังต่อไปนี้หรือไม่
ก. จานเพาะเชื้อไม่ได้วางในแนวนอน
ข. แล้วอาหารเลี้ยงเชื้อของคุณล่ะ ถ้าอาหารเลี้ยงเชื้อหมดอายุ เซลล์จะไม่ติด ลองใช้สื่อที่ปรุงสดใหม่
ค. อาจเป็นปัญหาของจาน เปลี่ยนจานยี่ห้ออื่นหรือใช้ขวดเพาะก็ไม่มีปัญหา
ง. คุณให้ความสนใจกับอิทธิพลของพัดลมเมื่อเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อหรือไม่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมีจานเพาะเลี้ยงจำนวนมากที่ต้องเปลี่ยน อาจทำให้เซลล์หดตัวและแตกได้ง่ายเนื่องจากการสูญเสียลมและน้ำ ถ้าเป็นเช่นนั้น ควรเปลี่ยนตัวกลางทีละตัว และอย่ากลัวที่จะเสียปิเปต ให้ใส่ใจกับประสิทธิภาพของการทำงาน!
5. เป็นเวลาสี่วันแล้วที่เซลล์ถูกย่อยและเพาะเชื้อในจานหลุม 24- และส่วนตรงกลางของแต่ละหลุมก็เต็มอยู่เสมอ สื่อถูกล้างด้วย PBS ทุกวัน และสถานการณ์เดียวกันนี้เกิดขึ้นเมื่อสื่อถูกเปลี่ยนในวันถัดไป ขอบยาวดีและตรงกลางเต็มไปด้วยเซลล์ที่ตายแล้ว?
ตอบ ถ้ารอบเซลล์หนาแน่นและเบาบางตรงกลาง มีสาเหตุโดยประมาณดังนี้
สื่อถูกเติมน้อยเกินไป สาเหตุหลักมาจากปัญหาความตึงของของเหลว
มีน้ำน้อยที่ด้านล่างของตู้อบหรือไม่
การสั่นสะเทือนหลังจากการเพาะเซลล์มากเกินไป เซลล์กระจายไปทั่วเนื่องจากแรงเหวี่ยง
กุญแจสำคัญที่ระบุว่าเซลล์มีการกระจายเท่าๆ กันหรือไม่คือเซลล์แต่ละประเภทมีความแตกต่างของแต่ละคน และการทำงานของเซลล์ของผู้อื่นอาจไม่เหมาะกับคุณ ดังนั้นคุณต้องสำรวจด้วยตัวคุณเองและค้นหาชุดกฎเฉพาะสำหรับเซลล์ของคุณเอง คุณมีประสบการณ์ดังต่อไปนี้:
(1) สารแขวนลอยในเซลล์ทั้งหมดที่จะเพาะต้องผสมกับปิเปตก่อนเพาะ
(2) ตามบันทึก ปริมาณของเหลวของ 24-แผ่นหลุมคือ 1 มล. อันที่จริง ปริมาตร 1 มล. ก็เพียงพอแล้ว
(3) เมื่อทำการฉีดวัคซีน ให้เติมตัวอย่างช้าๆ และอย่าลืมหมุนปลายปิเปตเล็กน้อย ไม่สามารถเพิ่มตัวอย่างเร็วเกินไปเพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้เซลล์สะสมที่จุดเติมตัวอย่างจุดเดียว และให้ความสนใจกับการเพิ่มตัวอย่างในส่วนต่างๆ นั่นคือ ในขณะที่เพิ่มปืนที่เคลื่อนที่ได้ หัว, เทียมทำให้เซลล์มีแนวโน้มที่จะกระจายอย่างสม่ำเสมอ. การทำเช่นนี้มีผลในการกระจายเซลล์อย่างสม่ำเสมอ
