1. การกู้คืน
●1. นำขวดแช่แข็งออกจากไนโตรเจนเหลว ใส่ลงในอ่างน้ำที่มีอุณหภูมิ 37 องศาทันที แล้วเขย่าเล็กน้อย หลังจากที่ของเหลวละลาย (ประมาณ 1-1.5 นาที) ให้นำออกมาและฉีดแอลกอฮอล์บางๆ แล้ววางไว้บนโต๊ะทำงานที่สะอาดเป็นพิเศษ
●2. ดูดสารแขวนลอยของเซลล์ข้างต้นเข้าไปในหลอดปั่นแยกขนาด 15 มล. ที่บรรจุสารตัวกลาง 10 มล. (ล้างหลอดแช่เย็นด้วยสารตัวกลางเพื่อล้างเซลล์ทั้งหมดที่เกาะติดกับผนังออก) และหมุนเหวี่ยงที่ 1,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที
●3. เทส่วนเหนือตะกอนออกและเติมสารสื่อกลาง 1 มล. เพื่อระงับเซลล์ ดูดเข้าไปในจานเพาะเชื้อขนาด 10 ซม. ที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อ 10 มล. แล้วเขย่าเบา ๆ ไปมาเพื่อให้เซลล์ในจานเพาะเชื้อกระจายอย่างสม่ำเสมอ
●4. ติดฉลากประเภทและวันที่ของเซลล์ ชื่อของผู้เพาะปลูก ฯลฯ และวางไว้ในตู้เพาะ CO2 เพื่อการเพาะปลูก หลังจากเซลล์ติดกับผนังแล้วให้เปลี่ยนสื่อ
●5. เปลี่ยนสื่อทุก 3 วัน
2. ผ่าน
●1. ทางเดินเมื่อความครอบคลุมของเซลล์ในจานเพาะเชื้อถึง 80 เปอร์เซ็นต์ -90 เปอร์เซ็นต์
●2. ดูดสารเดิม
●3. เติมทริปซินที่เหมาะสม (ให้เพียงพอกับเซลล์) และย่อยเป็นเวลา 1-2 นาที
●4. หลังจากที่เซลล์ถูกปัดเศษแล้ว ให้เพิ่มตัวกลางที่ประกอบด้วยซีรั่มในปริมาตรที่เท่ากันเพื่อยุติการย่อยอาหาร
●5. ใช้ปิเปตเพื่อระงับเซลล์ด้วยการปิเปต
●6. ดูดเซลล์เข้าไปในหลอดปั่นแยกขนาด 15 มล. และปั่นแยกที่ 1,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที
●7. เทส่วนเหนือตะกอนออก เติมสารขนาดกลาง 1-2มล. และระเบิดเซลล์
●8. ถ่ายโอนเซลล์ไปยังจานต่างๆ ขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์ โดยทั่วไปจะมีเซลล์มะเร็ง 5 เซลล์ และเซลล์ปกติ 3 เซลล์ ปลูกต่อไป.
3. Cryopreservation ย่อยเซลล์และหมุนเหวี่ยง (ibid.) แขวนเซลล์ด้วยสารละลายแช่แข็งที่เตรียมไว้ และกระจายไปยังขวดแช่แข็งที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ปล่อยทิ้งไว้สักครู่ แล้วระบุประเภทเซลล์และวันที่เก็บรักษาด้วยความเย็น 4 องศาเป็นเวลา 30 นาที, -20 องศาเป็นเวลา 30 นาที, -80 องศาในชั่วข้ามคืน จากนั้นใส่ในไนโตรเจนเหลวเพื่อเก็บรักษา การเตรียมสารละลายสำหรับการเก็บรักษาด้วยความเย็น: อาหารเลี้ยงเชื้อสมบูรณ์ 70 เปอร์เซ็นต์ บวก FBS 20 เปอร์เซ็นต์ บวก DMSO 10 เปอร์เซ็นต์ ควรเพิ่ม DMSO ทีละหยดช้าๆ เขย่าขณะหยด
